技術紹介 ＞ シンプルステインマウスMAX-PO(Rat)について

３．マウス・モノクローナル抗体に対する交差反応性

ラットクローン由来のモノクローナル一次抗体が増えてきた背景には、マウス・モノクローナル一次抗体との多重染色に対する需要が増してきたことがあげられます。そこで、マウス・モノクローナル抗体に対する交差反応性の検証も行いました。

　３－１．染色方法

検証のための染色は、以下のような条件で行いました。

組織切片および抗体

組織切片：ホルマリン固定パラフィン包埋切片

動物種：ラット

組織：腸間膜リンパ節、脾臓、十二指腸、胃、大脳、舌、心臓

一次抗体：抗Actin（クローンASM-1（mouse, IgG2a））（American Research Products, code:03-65001）

二次抗体：シンプルステインマウスMAX-PO(Rat)（from Goat）（ニチレイバイオサイエンス, code:414311）
対照 ： HRP標識-抗Mouse IgG（from Sheep）（Amersham Biosciences, code:NA9310）

染色手順

1. 脱パラフィン
2. 0.01M PBS洗浄, 5分
3. 内在性ペルオキシダーゼ不活性化処理
   0.3%過酸化水素水加メタノール, 10分
4. 0.01M PBS洗浄, 5分x3回
5. 正常ヤギorヒツジ血清処理, 10分
6. 一次抗体反応
   抗Actin, 5倍希釈, 60分
   
7. 0.01M PBS洗浄, 5分x3回
8. 正常ヤギorヒツジ血清処理, 1～2分
9. 二次抗体反応
   シンプルステインマウスMAX-PO(Rat), 30分
   または
   HRP標識-抗Mouse IgG, 100倍希釈, 30分
10. 0.01M PBS洗浄, 5分x3回
11. DAB発色反応, 4分
12. 0.01M PBS洗浄, 5分
13. イオン交換水洗浄, 3～4回
14. メチルグリーン核染色, 10分
15. 水洗
16. 脱水・透徹・封入
    （以上、全て室温にて処理）